tarea 2

Tarea 2

Medio de cultivo.

Un método fundamental para estudiar las bacterias es cultivarlas en un medio líquido o en la superficie de un medio sólido de agar. Los medios de cultivo contienen distintos nutrientes que van, desde azúcares simples hasta sustancias complejas como la sangre o el extracto de caldo de carne. Para aislar o purificar una especie bacteriana a partir de una muestra formada por muchos tipos de bacterias, se siembra en un medio de cultivo sólido donde las células que se multiplican no cambian de localización; tras muchos ciclos reproductivos, cada bacteria individual genera por escisión binaria una colonia macroscópica compuesta por decenas de millones de células similares a la original. Si esta colonia individual se siembra a su vez en un nuevo medio crecerá como cultivo puro de un solo tipo de bacteria.

Clasificación de medio de cultivo.

Según su aspecto físico:
• fosiferoliquidos
• Semi-sólidos
• Sólidos duros o muy duros
Según su uso:
• Selectivos
• Selectivos de enriquecimiento
• Diferenciales
• Para cultivar gérmenes anaerobios
• Para medir potencia de antibióticos
• De transporte en micro
• Para filtración a través de membrana
• Para cultivo de hongos y levaduras
• Para cultivo de protozoarios


Tipos de siembras en medios de cultivo.

El paso de una muestra microbiana a un medio de cultivo se denomina siembra o inoculación
El paso de una muestra de un medio a otro se denomina resiembra.
a) Siembra del inóculo en medio líquido:
O Con asa de siembra se adiciona al medio agitándola.
O Con pipeta se vierte agitándose hasta su homogeneización.
O Con hisopo o escobillón igual que con el asa de siembra.
b) Siembra de inóculo en medio sólido
a. Siembra de inóculo en placa
* Técnica de Barry: Para ello en el medio de cultiva previamente fundido en tubo se le añade el inóculo, se homogeiniza, se vierte en la placa Petri y se deja solidificar. Se utiliza para la determinación de CMI
* Siembra de muestra líquida en placa con asa de Digralsky: Consiste en distribuir la muestra de manera uniforme por la superficie del medio de cultivo contenido en la placa. Para ello adicionamos al medio sólido un inóculo líquido con la pipeta graduada, y posteriormente se extiende con el asa de Digralsky. Se utiliza para el recuento de viables y antibiogramas.
*Siembra por agotamiento o aislamiento en estría: Se tomará con el asa de siembra una cantidad adecuada depositando el inóculo en uno de los extremos superiores de la placa, se realizarán movimientos en zig-zag sin levantar el asa hasta concluir la siembra en toda la placa.
*Siembra por agotamiento: Aislamiento en estría múltiple. Se toma el inóculo y se deposita en el extremo superior, extendiéndose en la parte superior solamente. Flameamos y giramos ligeramente la placa continuando con el proceso anterior. Repetimos la operación 4 o 5 veces. El resultado son colonias cada vez más separadas como consecuencia de que cada vez se van arrastrando y separando más la muestra.
* Técnica de los cuatro cuadrantes: Con un rotulador dividimos la placa en 4 cuadrantes iguales. Con el asa extendemos por cada cuadrante el inóculo haciendo zig-zag sin flamear. Finalmente observaremos como en el último cuadrante las colonias se encuentran aisladas o separadas.
* Técnica de los 3 giros: Se rotula la placa de forma análoga con el asa de platino y se siembra por estría la mitad superior de la placa. Sin flamear giramos 90º y volvemos a sembrar (así hasta 3 veces). Esta técnica no es muy utilizada.
* Técnica de siembra por dilución: Se dispondrá de una batería de tubos y se adicionará una cantidad de muestra conocida en el primer tuvo, homogeneizamos diluimos en los siguientes tubos hasta obtener la dilución deseada. Una vez realizada la dilución (ej. 10-3 y 10-4) inoculamos en placas de cultivo y extendemos con el asa de Digralsky. Incubamos a la temperatura precisa durante 24 horas y recontamos.
b. Siembra del inóculo en tubo
* Siembra por estría en tubos con medio sólido inclinado: Con el asa de siembra se añade al tubo una cantidad de muestra realizando movimientos ascendentes en zig-zag. Este método es utilizado para conservar cepas durante largos periodos, así como para la realización de ciertas pruebas bioquímicas.
* Siembra por picadura: Con hilo de siembra introducir el asa en el medio de cultivo hasta el fondo en la zona central de este. Se utiliza en la siembra de cultivos semisólidos.
El paso de una muestra microbiana a un medio de cultivo se denomina siembra o inoculación
El paso de una muestra de un medio a otro se denomina resiembra.
a) Siembra del inóculo en medio líquido:
o Con asa de siembra se adiciona al medio agitándola.
o Con pipeta se vierte agitándose hasta su homogeneización.
o Con hisopo o escobillón igual que con el asa de siembra.
b) Siembra de inóculo en medio sólido
a. Siembra de inóculo
* Técnica de Barry: Para ello en el medio de cultiva previamente fundido en tubo se le añade el inóculo, se homogeiniza, se vierte en la placa Petri y se deja solidificar. Se utiliza para la determinación de CMI
* Siembra de muestra líquida en placa con asa de Digralsky: Consiste en distribuir la muestra de manera uniforme por la superficie del medio de cultivo contenido en la placa. Para ello adicionamos al medio sólido un inóculo líquido con la pipeta graduada, y posteriormente se extiende con el asa de Digralsky. Se utiliza para el recuento de viables y antibiogramas.
*Siembra por agotamiento o aislamiento en estría: Se tomará con el asa de siembra una cantidad adecuada depositando el inóculo en uno de los extremos superiores de la placa, se realizarán movimientos en zig-zag sin levantar el asa hasta concluir la siembra en toda la placa.
*Siembra por agotamiento: Aislamiento en estría múltiple. Se toma el inóculo y se deposita en el extremo superior, extendiéndose en la parte superior solamente. Flameamos y giramos ligeramente la placa continuando con el proceso anterior. Repetimos la operación 4 o 5 veces. El resultado son colonias cada vez más separadas como consecuencia de que cada vez se van arrastrando y separando más la muestra.
* Técnica de los cuatro cuadrantes: Con un rotulador dividimos la placa en 4 cuadrantes iguales. Con el asa extendemos por cada cuadrante el inóculo haciendo zig-zag sin flamear. Finalmente observaremos como en el último cuadrante las colonias se encuentran aisladas o separadas.
* Técnica de los 3 giros: Se rotula la placa de forma análoga con el asa de platino y se siembra por estría la mitad superior de la placa. Sin flamear giramos 90º y volvemos a sembrar (así hasta 3 veces). Esta técnica no es muy utilizada.
* Técnica de siembra por dilución: Se dispondrá de una batería de tubos y se adicionará una cantidad de muestra conocida en el primer tuvo, homogeneizamos diluimos en los siguientes tubos hasta obtener la dilución deseada. Una vez realizada la dilución (ej. 10-3 y 10-4) inoculamos en placas de cultivo y extendemos con el asa de Digralsky. Incubamos a la temperatura precisa durante 24 horas y recontamos.
b. Siembra del inóculo en tubo
* Siembra por estría en tubos con medio sólido inclinado: Con el asa de siembra se añade al tubo una cantidad de muestra realizando movimientos ascendentes en zig-zag. Este método es utilizado para conservar cepas durante largos periodos, así como para la realización de ciertas pruebas bioquímicas.
* Siembra por picadura: Con hilo de siembra introducir el asa en el medio de cultivo hasta el fondo en la zona central de este. Se utiliza en la siembra de cultivos semisólidos.